嗅質(zhì)蛋白4(OLFM4)，也被稱為抗凋亡蛋白GW112，G-CSF刺激的克隆1蛋白（HGC-1）或HOLFD，由OLFM4基因編碼的蛋白質(zhì)，該基因編碼olfactomedin家族的成員，該編碼蛋白是促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的抗凋亡因子，是促進(jìn)細(xì)胞粘附的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，它是一種多聚體蛋白，既可以在細(xì)胞外發(fā)現(xiàn)，與細(xì)胞表面凝集素和鈣粘蛋白相互作用，也可以在線粒體和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)相互作用，它可能通過促進(jìn)從S期到G2期的轉(zhuǎn)變來促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖，它可能在抑制EIF4EBP1磷酸化/失活中起作用，促進(jìn)細(xì)胞粘附，最有可能是通過與細(xì)胞表面凝集素和鈣粘蛋白的相互作用，它似乎控制胰腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞增殖，但在白血病細(xì)胞系中，它抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞分化和凋亡，該基因由視黃酸接觸誘導(dǎo)，信號(hào)傳導(dǎo)通過NFkappaB途徑連接。
本試劑盒人OLFM4免疫測(cè)定是一種三步法固相夾心ELISA，用于測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中的人OLFM4。試劑盒包含大腸桿菌表達(dá)重組人OLFM4和針對(duì)重組蛋白產(chǎn)生的抗體。使用天然人OLFM4獲得的結(jié)果顯示出與使用重組標(biāo)準(zhǔn)品獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線平行的線性曲線。這些結(jié)果表明，該試劑盒可用于測(cè)定天然人OLFM4的相對(duì)質(zhì)量值。
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物OLFM4，孵育清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色液后，若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色，則加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)OD值，顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中OLFM4的濃度。
雙抗體夾心模式圖
按操作順序形成抗體夾心結(jié)構(gòu)后，加入TMB 底物，板孔液體由無色變成藍(lán)色，再加入終止液變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測(cè)定。
檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的局限性
僅供科研使用，不能用于臨床診斷或治療。
試劑盒的使用期限不得超過試劑盒標(biāo)簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用測(cè)定稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品，并重復(fù)測(cè)定。稀釋劑、實(shí)驗(yàn)員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合變化。
樣本采集、處理和存儲(chǔ)的變化可能會(huì)導(dǎo)致樣本值的差異。
本試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點(diǎn)
混合蛋白質(zhì)溶液時(shí)，應(yīng)始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。此外，每種試劑應(yīng)單獨(dú)使用容器。
確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度，可以提高測(cè)定精度。
顯色劑應(yīng)保持無色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應(yīng)從無色變?yōu)樗{(lán)色。
應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質(zhì)溶液充分混合。
試劑盒組成及儲(chǔ)存條件
需要的其他材料
?酶標(biāo)儀，包含450nm測(cè)定波長(zhǎng)，同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳；
?移液器及槍頭；
?蒸餾水或去離子水；
?100-1000 mL刻度量筒；
?洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)；
?水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
?用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
注意事項(xiàng)
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會(huì)引起皮膚過敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品。處理后徹底洗手。
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