詳解抗凝收集血漿的方法

收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接離心分離血漿待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。其方法如下：<o:p></o:p> 1、肝素抗凝：<o:p></o:p> 最常用的抗凝劑，一般情況下對相關指標都不會有干擾，同時抗凝比例較大（抗凝劑： 全血=1:30），對血液基本沒有稀釋影響。<o:p></o:p>  肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖，帶有強大的負電荷，具有加強抗凝血酶III滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測，是電解質檢測的zui佳選擇，檢驗血標本中的鈉離子時，不能使用肝素鈉，以免影響檢測結果。也不能用于白細胞計數和分類，因肝素會引起白細胞聚集。 <o:p></o:p> 盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質濃度無顯著差別，但肝素鋰還是被認為是zui好的。這主要是人們認為肝素鈉可使鈉的測定值偏高，肝素銨可使血氨測定值偏高（尿素酶法測定）。<o:p></o:p>  肝素可抑制分子生物學中常用的一些工具酶，如限制性內切酶、Taq酶等，可影響PCR 的實驗結果。可采用一些方法消除肝素的抑制效應，如利用肝素酶，或在分離白細胞后用緩沖液洗滌白細胞兩次以上等。然而，許多實驗工作者仍不愿意在進行分子生物學實驗時采用肝素作抗凝劑。<o:p></o:p>   2、EDTA抗凝：<o:p></o:p> 乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會將鈣從 反應點移走將阻止和終止內源性或外源性凝血過程，從而防止血液凝固，與其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細胞的形態影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。<o:p></o:p> 用于一般血液學檢查，不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。由于EDTA會螯合重金屬離子，用該抗凝劑的話，部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失，具體看客戶測定的指標來選擇，做血常規的話必須用EDTA抗凝。<o:p></o:p>   3、枸櫞酸鹽抗凝：<o:p></o:p> 檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用，國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。<o:p></o:p> 采血時應注意采足血量，以保證檢驗結果的準確性，采血后應立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較小（抗凝劑：全血=1:9），對血液有一定的稀釋，一般不建議。<o:p></o:p> 選擇抗凝的注意點：<o:p></o:p> ① 每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;<o:p></o:p> ② 收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;<o:p></o:p> ③ 抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿）;<o:p></o:p> ④ 抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。<o:p></o:p>   4、血清、血漿收集好后，暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如不反復凍融，-20℃以下可保存一個月,-70℃以下可保存三個月。<o:p></o:p>

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