酶聯生物教您細胞是怎么轉染的

<p>轉染 ，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技能。隨著基因與蛋白功用研討的深化，轉染目前已成為試驗室工作中常常涉及的根本辦法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理辦法將基因導入細胞的范例；化學介導辦法許多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染辦法、和多種陽離子物質介導的技能；生物介導辦法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技能。</p> <p>抱負細胞轉染辦法，應該具有轉染功率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技能，是目前轉染功率的辦法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染辦法的準備程序雜亂，常常對細胞類型有很強的挑選性，在一般試驗室中很難遍及。其它物理和化學介導的轉染辦法，則各有其特色。<br /> 需求指出的一點，無論采用哪種轉染技能，要取得*優的轉染成果，或許都需求對轉染條件進行優化。影響轉染功率的因素許多，從細胞類型、細胞培育條件和細胞生長狀況，到轉染辦法的操作細節，都需求考慮。<br /> 一、細胞傳代<br /> 1. 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培育皿，離心管。<br /> 2. 棄掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗刷兩次。<br /> 3. 用Tip頭參加1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培育瓶壁，調查到細胞徹底從壁上脫落下來為止。<br /> 4. 參加1ml的含血清培育基停止反應。<br /> 5. 用Tip頭多次吹吸，使細胞徹底分散開。<br /> 6. 將培育液裝入離心管中，1000rpm離心5min。<br /> 7. 用培育液重懸細胞，細胞計數后挑選0.8X106個細胞參加一個35mm培育皿。<br /> 8. 將適宜體積徹底培育液參加離心管中，混勻細胞后悄悄參加培育皿中，使其均勻分布。<br /> 9. 將培育皿轉入CO2培育箱中培育，第二天轉染。<br /> 二、細胞轉染<br /> 1. 轉染試劑的準備<br /> ① 將400ul去核酸酶水參加管中，震動10秒鐘，溶解脂狀物。<br /> ② 震動后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震動。<br /> 2. 挑選適宜的混合比例（1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量）來轉染細胞。在一個轉染管中參加適宜體積的無血清培育基。參加適宜質量的MyoD或者EGFP的DNA，震動后在參加適宜體積的轉染試劑，再次震動。<br /> 3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。<br /> 4. 吸去培育板中的培育基，用PBS或者無血清培育基清洗一次。<br /> 5. 參加混合液，將細胞放回培育箱中培育一個小時。<br /> 6. 到時后，依據細胞品種決議是否移除混合液，之后參加徹底培育基持續培育24－48小時。<br /> 三、第2次細胞傳代<br /> 1. 在轉染后24小時，調查試驗成果并記錄綠色熒光蛋白表達狀況。<br /> 2. 再次進行細胞傳代，依照免疫染色適宜的密度0.8X105個細胞/35mm培育皿將細胞從頭轉入培育皿中。<br /> 3. 在正常條件下培育24小時后依照染色要求條件固定。&nbsp;</p>