如何選擇合適的 ELISA 試劑盒

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是指將可溶性抗原或抗體吸附于聚苯乙烯等固相載體上，進(jìn)行免疫反應(yīng)，以測定液體生物標(biāo)本中微量物質(zhì)的一種定性、定量方法。       ELISA檢測具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡單、樣本量小等特點(diǎn)，且檢測結(jié)果準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，廣泛應(yīng)用于臨床和科研中，用于抗原抗體檢測以及病原體檢測。目前，市面上ELISA試劑盒品牌眾多，檢測指標(biāo)種類繁多，產(chǎn)品別名繁多，產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊。我們應(yīng)該如何選擇一款合適的ELISA試劑盒產(chǎn)品？需要考慮哪些指標(biāo)？<o:p></o:p>       首先，用戶需要明確實(shí)驗(yàn)的目的是功能測定還是目標(biāo)分子的含量檢測。功能測定一般是酶與底物的反應(yīng)，分析生物活性。Elisa則專門用于目標(biāo)分子的含量檢測。<o:p></o:p>       其次，如果研究的索引是蛋白質(zhì)或者多肽，可以到Uniprot數(shù)據(jù)庫查詢對應(yīng)的UniprotID，選擇產(chǎn)品時同時查看索引名稱和UniprotID；如果研究的索引是小分子半抗原，這類化學(xué)物質(zhì)可以到ChemSpider化學(xué)品庫中查詢對應(yīng)的CAS號，根據(jù)CAS號選擇需要的產(chǎn)品。<o:p></o:p>       最后，我們還需要根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)查詢或預(yù)測靶標(biāo)在生物樣本中的存在情況或含量范圍，選擇具有足夠靈敏度的試劑盒，并與廠家確認(rèn)該試劑盒的適用樣本是否包括客戶自身的實(shí)驗(yàn)樣本。<o:p></o:p>       在此基礎(chǔ)上，如果研究人員有多個品牌的同類產(chǎn)品可供選擇，還應(yīng)該比較試劑盒產(chǎn)品的多項(xiàng)性能參數(shù)，包括靈敏度、特異性、精密度、準(zhǔn)確度、線性、穩(wěn)定性以及自然樣本數(shù)據(jù)。這些參數(shù)是ELISA作為一種人工建立的微量分析方法必須考慮的固有特性，以確保其有效性和可靠性。   <img src="/images/upload/Image/微信圖片_20250331165121.jpg" alt="elisa試劑盒" width="500" height="375" /><o:p></o:p>       敏感度<o:p></o:p>       靈敏度——試劑盒對待測物質(zhì)的最低檢測能力。如果待測物質(zhì)的濃度很低，我們可以選擇靈敏度較高的試劑盒。靈敏度值是空白對照標(biāo)準(zhǔn)差對應(yīng)濃度值的3倍。<o:p></o:p>       特異性<o:p></o:p>       特異性決定了其他分子與試劑盒抗體結(jié)合的能力。交叉反應(yīng)性越小，試劑盒的特異性越好。通常需要測定試劑盒是否與當(dāng)前物種同家族的蛋白、其他物種的蛋白、血清中的常見因子（如嗜異性抗體、類風(fēng)濕因子等）以及靶蛋白相互作用蛋白無交叉反應(yīng)。<o:p></o:p>       精確<o:p></o:p>       精密度——又稱重復(fù)性，是對同一樣品進(jìn)行重復(fù)測量時誤差大小的評價參數(shù)。一般要求板間、板內(nèi)精密度控制在10%以內(nèi)。<o:p></o:p>       恢復(fù)<o:p></o:p>       回收率——通常以加標(biāo)回收率來衡量，回收率在80%到120%之間為合格。測量方法是將標(biāo)準(zhǔn)品添加到天然樣品基質(zhì)中。未添加標(biāo)準(zhǔn)品的天然樣品基質(zhì)作為空白對照。回收率值是目標(biāo)物的測得濃度與添加標(biāo)準(zhǔn)品濃度的比值，以百分比表示。回收率過高或過低都會產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果，影響測量值的準(zhǔn)確性。<o:p></o:p>       線性<o:p></o:p>       將適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品加入天然樣品基質(zhì)中，稀釋2倍、4倍、8倍進(jìn)行檢測，測定各濃度下的回收率，回收率在80%~120%之間為合格。<o:p></o:p>       穩(wěn)定<o:p></o:p>       驗(yàn)證一般采用加速破壞性實(shí)驗(yàn)，將未開封的試劑盒分別在37℃和2-8℃條件下放置一定時間，考察各項(xiàng)性能指標(biāo)的偏差，偏差在10%以內(nèi)為合格。穩(wěn)定性越好，試劑盒可以保存的時間越長。<o:p></o:p>       天然樣品檢測<o:p></o:p>       最后，還應(yīng)明確試劑盒可檢測的天然樣本及適用的樣本類型。根據(jù)目標(biāo)的性質(zhì)預(yù)測適合檢測的樣本，并實(shí)際檢測5個以上該類型的樣本，并在客戶需要時提供一定的樣本含量數(shù)據(jù)參考。<o:p></o:p>

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