生化試劑，常見問題的解決方法

<p>試劑空白吸光度是反映試劑質量的目標之一，但不能反映試劑質量的悉數。試劑成份、純度、用量及安穩性，才是確保試劑質量的關鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗攪擾效果，主要是經過參加抗攪擾物質或運用新的色素原以防止內源性物質的攪擾。但值得注意的是：一些實驗項目在消除內源性物質攪擾的一起，會帶來樣品含量真實性的改變。<br /> 1 試劑空白<br /> 試劑空白吸光度是反映試劑質量的目標之一。每種試劑都有必定的空白吸光度規模，試劑空白吸光度的改動往往提示該試劑的蛻變；如運用Trinder反響為原理的檢測試劑會因含酚類物質被氧化為醌而變為赤色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉肽酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質分化出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變污濁。這些狀況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反響，在放置進程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反響，其試劑空白吸光度越低越好，不能超越一個高限；相反，吸光度下降的反響，其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因而，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數輸入儀器，如經核對超限，儀器會主動報警，提示替換試劑。需求指出的是，還原型輔酶I（或II）等投料量缺乏或殘次的原料，往往需求加大用量，才使&ldquo;表觀&rdquo;吸光度上升，將就過試劑空白核對的&ldquo;關&rdquo;，其成果為如下狀況：<br /> 1線性規模變窄 現象：高值測不高。原因：生產試劑時有效成分投料量缺乏；試劑成份安穩性較差。<br /> 2 靈敏度變低現象：酶促反響速度曲線斜率下降，測定成果有嚴峻系統誤差。原因：試劑底物濃度缺乏。<br /> 3 低值偏高 現象：試劑空白的改變曲線（吸光度VS時刻）明顯動搖。原因：試劑本身不安穩，自行分化；東西酶純度不行，雜酶含量超限，導致攪擾效果。<br /> 2 樣品信息<br /> 樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定成果發作非化學反響的攪擾。因而，應根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在成果核算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，削減攪擾程度。<br /> 3 測定規模<br /> 每種待測物都有一個可測定的濃度或活性規模，樣品成果若超越此規模，分析儀將顯現成果超越規模的提示。表示試劑現已蛻變，應替換合格試劑。<br /> 4 底物耗盡<br /> 運用接連監測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性十分高，底物挨近被耗盡，吸光度上升或下降會超越某一吸光度改變規模，監測期的吸光度將違背線性，使測定成果不可靠。<br /> 5 酶的預活化<br /> 測定血清中的某些酶，如CK，離體（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基（一SH）被氧化造成的。只要經過恰當的還原效果才干從頭激活。如CK&mdash;NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研討證明，NAC對血清中已失活的CK活化進程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時刻較長的理論依據。在AST，ALT采用IFCC推薦辦法測守時需求磷酸吡哆醛預活化。需求著重：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的成果要高些。<br /> 6 試劑抗攪擾效果的合理性有些液體雙試劑，其實質并不真正具有抗攪擾的能力而只是處理了試劑的液體化和安穩性問題。如，ALT試劑盒中，NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不安穩，在pH&gt;8.7時才干安穩保存。因而，為了確保試劑安穩性，液體雙試劑的R1需求保持pH&gt;8.7，但此刻LDH活性大大下降，就失掉消除內源性丙酮酸的功用，只要參加試劑R2后，反響混合液的pH下降至LDHzui適pH，在經過延遲時刻60 S后，才干消除內源性丙酮酸的攪擾。再如，Tfinder反響中抗Vc攪擾問題：由于維生素c易氧化，樣品中Vc會競爭反響生成的過氧化氫，而發作負攪擾。因而，在試劑R1中參加抗壞血酸氧化酶，這種辦法是有效的，但不必定有很大的含義。由于Vc攪擾有必要一起具有二個條件：a）Vc攝入量較多；b）采血后當即測定。實驗標明離體血清中Vc在90 min后會悉數被氧化。又如，運用胺類新色原。a）分子共軛結構特性使得靈敏度進步，相應能夠削減樣本用量，zui終能有效地下降攪擾物的量．b）使生成胺類色素原zui大吸收峰由500~520 nm移至550 nm以上，以避開黃疸、溶血攪擾。如：亞鐵氰化鉀一H 0 ，能有效防止黃疸攪擾的理論依據是亞鐵氰化鉀與H。0。親和力遠遠大于膽紅素。甘油三酯測定，有人主張選用雙試劑辦法消除內源性甘油，這個辦法是可行的，但忽視了一個化學平衡理論。由于一切的酯在水溶液中都不是簡略地以酯的方式存在，而是以水解與酯化相平衡的方式存在。在一個平衡系統中，假如去除游離甘油，這個平衡就向生成甘油方向移動，甘油三酯就會從頭水解，生成新的甘油，到達新的平衡，因而樣品與R1試劑孵育時刻越長，測得甘油三酯值就越低。甘油三酯測定，不只要去除游離甘油，而且還要戰勝樣本含量真實性發作的改變，試劑中有必要參加甘油激酶，而且延遲時刻要標準化。所以，一些實驗項目在消除內源性物質攪擾的一起，會帶來樣品含量真實性的改變。<br /> 酶聯生物一路走來依托豐厚的經歷、優秀的質量、足夠的庫存、精確的交貨時刻、極具競爭力的價格的優勢等成為試劑行業的遙遙*者。當然這些都離不開我們的支撐。我們在日后不論是銷售部分、技術部分還是行政部分都要不斷強大，虛心學習，群策群力，事無具細的為客戶所想，急客戶所急。讓客戶滿足，才是我們永久的追求！&nbsp;</p>