ELISA試劑盒實驗條件

<p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋體">（</font>1<font face="宋體">）</font><strong><font face="宋體"> </font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋體">試劑盒</font></strong><font face="宋體">固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是</font><font face="Calibri">40</font><font face="宋體">孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋體">試劑盒實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋體">（</font>2<font face="宋體">） </font><strong><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋體">試劑盒</font></strong><font face="宋體">包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好</font><font face="Calibri">,</font><font face="宋體">吸附時一般要求</font><font face="Calibri">PH</font><font face="宋體">在</font><font face="Calibri">9.0</font><font face="宋體">～</font><font face="Calibri">9.6</font><font face="宋體">之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也 有一定影響</font><font face="Calibri">,</font><font face="宋體">一般多采用</font><font face="Calibri">4</font><font face="宋體">℃ </font><font face="Calibri">18</font><font face="宋體">～</font><font face="Calibri">24</font><font face="宋體">小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（</font><font face="Calibri">0.1</font><font face="宋體">、</font><font face="Calibri">1.0</font><font face="宋體">和</font><font face="Calibri">10</font><font face="宋體">&mu;</font><font face="Calibri">g/ml</font><font face="宋體">等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽 性標(biāo)本的</font><font face="Calibri">OD</font><font face="宋體">值。選擇</font><font face="Calibri">OD</font><font face="宋體">值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為</font><font face="Calibri">1</font><font face="宋體">～</font><font face="Calibri">10</font><font face="宋體">&mu;</font><font face="Calibri">g/ml</font><font face="宋體">。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋體">（</font>3<font face="宋體">） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋體">法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取&ldquo;方陣法&rdquo;（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋體">（</font>4<font face="宋體">） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如</font><font face="Calibri">OPD</font><font face="宋體">等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有 條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如</font><font face="Calibri">TMB</font><font face="宋體">和</font><font face="Calibri">ABTS</font><font face="宋體">是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋體">試劑盒底物作用時間，以</font><font face="Calibri">10-30</font><font face="宋體">分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是</font><font face="Calibri">H2O2</font><font face="宋體">在臨用前加入。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋體;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p>